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Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型板3-12%預(yù)制膠,通用型)

Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型板3-12%預(yù)制膠,通用型)

產(chǎn)品編號:RTD6139-0312

產(chǎn)品規(guī)格:3-12%

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥1500

Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒

   Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit  Ver.730852

貨號

名稱

包裝

RTD6139-0312

Blue/Clear非變性凝膠電泳試劑盒(U型板3-12%預(yù)制膠,通用型)

10

RTD6139-0416

Blue/Clear非變性凝膠電泳試劑盒(U型板4-16%預(yù)制膠,通用型)

10

貨品內(nèi)容:

組份

貨號

名稱

規(guī)格

保存

1

RTD6138-0312

3-12% RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠

10

4

RTD6138-0416

4-16% RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠

10

4

2

BC500P

10×BN/CN PAGE電泳緩沖液(干粉)

500 ml

RT

3

PL114

4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

1 ml

-20

4

BC270

2% G-250染料(電泳用)

20 ml

RT

5

BC260

5% G-250染料(上樣用)

1 ml

4

6

說明書

一份

產(chǎn)品簡介:


Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一種從生物樣品(質(zhì)膜,胞漿等)中非變性分離蛋白質(zhì)復(fù)合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM,digitonin)將蛋白復(fù)合體從細(xì)胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考馬斯亮藍(lán) G-250 代替 SDS與蛋白結(jié)合而使其帶負(fù)電荷,根據(jù)蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是電泳緩沖液中不加入任何染料,電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài),然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考馬斯亮藍(lán)G-250存在,使蛋白都覆蓋上負(fù)電荷,可以分離堿性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只適合于酸性蛋白(pI<7)的分離。

本產(chǎn)品包括BN/CN-PAGE制膠的所有成分,方便使用。可以用于分離分子量在 60 kD-1000 kD 的蛋白復(fù)合體,樣品可以來于胞漿、細(xì)胞總裂解液、細(xì)胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實(shí)驗(yàn),也可直接用于電洗脫制備蛋白。


● 運(yùn)輸和貯存:

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸;組份按照標(biāo)簽溫度貯存;有效期一年。

使用說明:

1. 樣品制備:

   該試劑盒不含樣品制備的相關(guān)試劑,根據(jù)樣品種類選擇不同提取方法。植物類囊體BN樣品制備可以選擇植物類囊體膜提取試劑盒(貨號:RTU5002);動物總蛋白BN樣品制備可以選擇動物胞漿活性蛋白提取試劑盒(貨號:RTD8106);動物膜蛋白BN樣品制備可以選擇動物膜蛋白提取試劑盒(貨號:RTD8111,RTD8112);動物線粒體BN樣品制備可以選擇動物線粒體提取試劑盒(貨號:RTD8115和RTD8116)。


2. 電泳:

2.1 拆開預(yù)制膠包裝,將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。

注:伯樂Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向(下圖)。


六一其他系列,君意東方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準(zhǔn)備電泳緩沖液:

將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液(干粉)溶于500 ml滅菌水中,徹底溶解,測定pH應(yīng)為7.0左右,不要調(diào)節(jié)pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳:

陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進(jìn)行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳:

陽極緩沖使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液,陰極緩沖液按照下表配制:

 

1×藍(lán)色陰極緩沖液

 

150 ml

10×BN/CN PAGE電泳緩沖液

15 ml

2% G-250 染料(電泳用)

1.5 ml

超純水

定容至150 ml

2.3準(zhǔn)備樣品:

2.3.1 CN-PAGE電泳:

總體積

10 μl

蛋白樣品

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

2.5 μl

超純水

補(bǔ)至10 μl

 

不要加熱

2.3.2 BN-PAGE電泳:

2.3.2.1 植物類囊體膜蛋白電泳:

總體積

10 μl

 

含去垢劑樣品*

植物類囊體膜蛋白樣品

2%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白上樣)

1 μl

超純水

補(bǔ)至10 μl

 

不要加熱

*植物類囊體膜蛋白電泳中,含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則:

植物類囊體樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM(n-Dodecyl β-D-maltoside,β-DM, n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷)終濃度為2%,則需要G-250終濃度為0.5%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料1 μl。

2.3.2.2 動物線粒體BN樣品電泳:

總體積

10 μl

 

含去垢劑樣品*

動物線粒體BN樣品

1%DDM增溶)

x μl

4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液

2.5 μl

5% G-250染料(蛋白上樣)

0.25 μl

超純水

補(bǔ)至10 μl

 

不要加熱

*動物線粒體BN樣品電泳中,含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則:

動物線粒體BN樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/8。例如樣品中DDM終濃度為1%,則需要G-250終濃度為0.125%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.25 μl。


2.4電泳過程;

2.4.1 CN-PAGE電泳:

電泳內(nèi)外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔),輕輕撥出預(yù)制膠梳子,用1ml吸頭沖洗加樣孔3次,隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。

CN-PAGE電泳

恒電壓

起始電流

結(jié)束電流

電泳時(shí)間

120V

10-15mA/板膠

4-10mA/板膠

50+min

注:冰浴電泳

2.4.2 BN-PAGE電泳:

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液;內(nèi)槽開始電泳使用的是1×藍(lán)色陰極緩沖液,冰浴電泳,等待電泳指示前沿到達(dá)凝膠1/3處時(shí),將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液,繼續(xù)后續(xù)電泳,因?yàn)檫^多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續(xù)的轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)。

BN-PAGE電泳條件(一板膠)

恒電壓

起始電流

電泳時(shí)間

緩沖液

 

120 V

8-15 mA

20-25 min

1×藍(lán)色陰極緩沖液

冰浴電泳

                        指示前沿至凝膠頂部三分之二處,更換內(nèi)槽緩沖液為1×BN/CN 電泳緩沖液

恒電壓

繼續(xù)電泳時(shí)間

結(jié)束電流

緩沖液

 

120 V

45 min +

3-5 mA

1×BN/CN電泳緩沖液

冰浴電泳

3. 轉(zhuǎn)膜:

BN-PAGE轉(zhuǎn)膜必須用PVDF膜,不能用NC膜,因?yàn)镹C膜與G-250結(jié)合非常緊密,不易去除。轉(zhuǎn)膜后PVDF膜上的藍(lán)色染料可以用無水甲醇漂洗去除。轉(zhuǎn)膜緩沖液推薦使用10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液(貨號:BC600P)。

4. 染色:

4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,加入適量FastBlue蛋白染色液或常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),條帶1-2分鐘即可見。

4.2 搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至條帶清晰可見。

4.3 加入適量蒸餾水脫色,期間更換1-2次蒸餾水,搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至背景干凈。

4.4 觀察保存結(jié)果。

5. 實(shí)驗(yàn)示例:

BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩(wěn)壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳

BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳



K562 膜蛋白BN-WB檢測
樣品:膜蛋白提取樣品用2%DIG和1%DM增溶( 貨號:RTD8111,動物膜蛋白提取試劑盒(細(xì)胞)) ,
胞漿蛋白CY做對照
電泳:3-12% BN預(yù)制膠(貨號:RTD6138-0312),穩(wěn)壓200V 1×藍(lán)色陰極緩沖液至指示前沿距離膠上沿2/3處,
更換為無色1×BN/CN PAGE電泳緩沖液,電泳時(shí)間共83分鐘
膠預(yù)處理:膠浸泡于buffer中(12.5mM Tris,2%SDS,20%甘油,50mM DTT pH6.8),微波煮沸20秒,37度15min后轉(zhuǎn)膜
轉(zhuǎn)膜:0.45μm PVDF膜,10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液(貨號:BC600P)稀釋為1×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液加20%甲醇,
恒流200mA  2小時(shí),未冰浴。
轉(zhuǎn)膜效果檢測:膜用麗春紅染色液染色(貨號:RTD6301)有可見條帶,膠用FastBlue蛋白染色液染色
(貨號:RTD6202)幾乎無條帶,證明轉(zhuǎn)膜成功。膜用無水甲醇清洗5分鐘去除膜上藍(lán)色殘余。
封閉:Western快速封閉液(貨號:WR5020)  RT  封閉10 分鐘;
圖1 一抗:兔單抗GAPDH 1:10000  RT 60min;羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光6秒
圖2 膜使用Western一抗二抗去除液(弱堿,溫和型)(貨號:WS1200)37度15min,快封10分鐘,
一抗:兔Na-K ATPase 1:5000  RT 60min,羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60min,ECL曝光1秒




Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)

使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:

1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit development in tomato plants

Author: Jinyan Li, Keru Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo, Hongliang Zhu

Journal: New Phytologist  2023,Volume237, Issue4,F(xiàn)ebruary 2023,Pages 1188-1203

Institution China Agricultural University

Paper linkhttps://doi.org/10.1111/nph.18594

 

2. [2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1, functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella

Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin, Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen

Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024) 81:118 

Institution: Beijing Normal University

Paper linkhttps://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3

 

3. [2022 IF2.6] What are the main proteins in the hemolymph of Haemaphysalis flava ticks?

Author: Dan Li , Lei Liu , Zi-ling Liu , Yuan Tian , Xin Gao,Tian-yin Cheng

Journal: Frontiers in Veterinary Science  Published 17 July 2024

Institution: Hunan Agricultural University

Paper link https://doi.org/10.3389/fvets.2024.1387719

 


 
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